Utilidad de la determinación del perfil de ácidos grasos / Usefulness of the determination of the fatty acids profile

Resumen Al tener en cuenta las consecuencias de los desequilibrios nutricionales en el desarrollo de las enfermedades, se considera importante determinar el perfil de ácidos grasos (AG) en dietas con distintas fuentes lipídicas y su impacto sobre los AG del suero de ratas. Se prepararon dietas con distintas fuentes lipídicas y completas en el resto de los nutrientes. Las fuentes lipídicas fueron: manteca, aceite de oliva, aceite de girasol alto oleico, aceite de girasol y aceite de soja (control). Los animales recibieron las dietas durante 10 días. Se determinó el perfil de AG de las dietas y del suero de las ratas por cromatografía gaseosa. Los cambios en el perfil de AG en suero se producen en función de la fuente lipídica aportada por la dieta. Por ende, es importante esta determinación como diagnóstico de la deficiencia de ácidos grasos esenciales, EPA y DHA, cuyas funciones son fundamentales para el funcionamiento del organismo.

Abstract Taking into account the consequences of nutritional imbalances in the development of diseases, it is considered important to determine the profile of fatty acids (FA) in diets with different lipid sources and their impact on serum FA of growing rats. Diets with different lipid sources and complete in the rest of the nutrients were prepared. The lipid sources used were butter, olive oil, high oleic sunflower oil, sunflower oil, and soybean oil (control). Animals were fed with experimental and control diets for 10 days. The FA profile of the diets and of rat serum was determined by gas chromatography (GC). Changes in FA profile in serum occur depending on the source of fat provided by the diet. Therefore, the determination of fatty acids is of utmost importance, as a diagnosis of the deficiency of essential fatty acids, EPA and DHA, whose functions are essential for the proper functioning of the body.

Resumo Tendo em conta as consequências dos desequilíbrios nutricionais no desenvolvimento das doenças, considera-se importante determinar o perfil de ácidos graxos (AG) em dietas com diferentes fontes lipídicas e o seu impacto nos AG do soro de ratos. Foram elaboradas dietas com diferentes fontes lipídicas e completas no restante dos nutrientes. As fontes lipídicas utilizadas foram: manteiga, azeite, óleo de girassol alto oleico, óleo de girassol e óleo de soja (controle). Os animais foram alimentados com dietas por 10 dias. O perfil de AG das dietas e o soro dos ratos foi determinado por cromatografia gasosa. Alterações no perfil de AG em soro ocorrem dependendo da fonte lipídica fornecida pela dieta. Por isso, esta determinação é de extrema importância, como diagnóstico da deficiência de ácidos graxos essenciais, EPA e DHA, cujas funções são essenciais para o funcionamento do organismo.

Desarrollo y validación de un método de cromatografía gaseosa para la determinación de mentol, salicilato de metilo, timol y ácido benzoico en solución antiséptica / Development and validation of a gas chromatographic method for the determination of menthol, methyl salicylate, thymol, and benzoic acid in antiseptic solution

RESUMEN Se desarrolló y validó un método por cromatografía gaseosa para la cuantificación simultánea de mentol (MT), salicilato de metilo (SM), timol (TM) y ácido benzoico (AB) en una solución antiséptica bucal. Se utilizó una columna DB-WAX y dietilenglicol como estándar interno. Se determinó la linealidad en un intervalo de concentraciones de 64,00 a 96,00 µg/mL (MT), 80,00 a 120,00 µg/mL (SM), 96,00 a 144,00 µg/mL (TM) y 48,00 a 72,00 µg/mL (AB), obteniendo coeficientes de correlación superiores a 0,999, y coeficientes de variación de los factores de respuestas de 1,18, 1,95, 3,52 y 1,48%, respectivamente. Se establecieron límites de detección de 0,51; 1,14; 3,34 y 1,402 ng/mL para el MT, SM, TM y AB, respectivamente, mientras los límites de cuantificación fueron de 1,45, 3, 43, 9, 73 y 4, 36 ng/mL en cada caso. Los porcentajes de recuperación fueron de 100,03, 99, 31, 99, 92 y 100,12; con coeficientes de variación de 0,42, 0,79, 0,66 y 0,76% para cada caso. El método fue lineal, exacto, preciso y selectivo para la determinación de los analitos en el control de calidad.

SUMMARY A method was developed and validated by gas chromatography for the simultaneous quantification of menthol (MT), methyl salicylate (SM), thymol (TM) and benzoic acid (AB) in an oral antiseptic solution. A DB-WAX column and diethylene glycol was used as internal standard. Linearity was determined in a concentration range of 64.00 to 96.00 µg/mL (MT), 80.00 to 120.00 µg/mL (SM), 96.00 to 144.00 µg/mL (TM) and 48.00 to 72.00 µg/mL (AB) achieving correlation coefficients greater than 0.999, and coefficients of variation of the response factors of 1.18, 1.95, 3.52 and 1.48%, respectively. Detection limits were established: 0.51, 1.14, 3.34 and 1.402 ng/mL for MT, SM, TM, and AB, respectively, while the quantification limits were 1.45, 3.43, 9.73 and 4.36 ng/mL in each case. Recovery percentages were 100.03, 99.31, 99.92 and 100.12; with coefficients of variation of 0.42, 0.79, 0.66 and 0.76% for each case. The method was linear, accurate, precise, and selective for the determination of analytes in quality control.

Bisfenol-A: cuantificacion en orina de mujeres embarazadas por cromatografia gaseosa-espectrometria de masa / Bisfenol-A: quantification in urine of pregnant women by gas chromatography-mass spectrometry / Bisfenol-A: quantificacao em urina de gestantes por cromatografia gasosa-espectrometria de massa

El uso de bisfenol-A (BPA) a nivel de la industria global se ha venido incrementando en los ultimos anos, y fueron los mercados emergentes los impulsores de esta demanda creciente. Las aplicaciones de BPA en la industria de los alimentos y bebidas representan solo del 3 al 4% del consumo global de policarbonato, pero su uso esta siendo reexaminado debido a que se conocieron varios trabajos cientificos que indican la existencia de una relacion directa entre el BPA y los efectos adversos para la salud. La contaminacion de los alimentos y bebidas se produce por migracion del BPA desde los envases que los contienen (alimentos enlatados, vinos, etc.), y es la principal fuente de exposicion en el humano. Para evaluar dicha exposicion se desarrollo y valido un metodo analitico por cromatografia gaseosa acoplada a espectrometria de masa para la cuantificacion de BPA total en orina de mujeres embarazadas atendidas en el Hospital Italiano de Buenos Aires en el ano 2013, con un limite de cuantificacion de 2,0 ng/mL y un limite de deteccion de 0,8 ng/mL. De las 149 muestras de orina analizadas, el 66,4% fueron cuantificables, con la mediana de BPA total de 4,8 ng/mL (4,3 ng/mg de creatinina) y la media geometrica de 4,8 ng/mL (4,7 ng/mg de creatinina).

The use of bisphenol-A (BPA) at the level of the global industry has been increasing in recent years, with emerging markets being the drivers of this growing demand. BPA applications in the food and beverage industry represent only 3 to 4% of the global consumption of polycarbonate, but its use is being reexamined because several scientific works were reported indicating the existence of a direct relationship between BPA and adverse effects on health. The contamination of food and beverages is produced by the migration of BPA from the containers that hold them (canned foods, wines, etc.) and it is the main source of exposure in humans. To evaluate this exposure, an analytical method was developed by gas chromatography coupled to mass spectrometry for the quantification of total BPA in urine of pregnant women treated at the Hospital Italiano de Buenos Aires in 2013, with a limit of quantification of 2.0 ng/mL and of detection of 0.8 ng/mL. Of the 149 urine samples analyzed, 66.4% were quantifiable, with a median total BPA of 4.8 ng/mL (4.3 ng/mg creatinine) and a geometric mean of 4.8 ng/mL (4.7 ng/mg creatinine).

O uso de bisfenol-A (BPA) ao nivel da industria global foi aumentando nos ultimos anos, e foram os mercados emergentes que deram impulso a essa demanda crescente. As aplicacoes de BPA na industria de alimentos e bebidas representam apenas 3 a 4% do consumo global de policarbonato, mas seu uso esta sendo reexaminado visto que varios trabalhos cientificos indicando a existencia de uma relacao direta entre o BPA e os efeitos adversos na saude foram conhecidos. A contaminacao dos alimentos e bebidas e produzida pela migracao de BPA das embalagens que os contem (alimentos enlatados, vinhos, etc.) e e a principal fonte de exposicao em humanos. Para avaliar esta exposicao, foi desenvolvido e avaliado um metodo analitico por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas para a quantificacao do BPA total na urina de gestantes atendidas no Hospital Italiano de Buenos Aires em 2013, com um limite de quantificacao de 2,0 ng/mL e um limite de deteccao de 0,8 ng/mL. Das 149 amostras de urina analisadas, 66,4% foram quantificaveis, com uma mediana de BPA total de 4,8 ng/mL (4,3 ng/mg de creatinina) e a media geometrica de 4,8 ng/mL (4,7 ng/mg de creatinina).

Validación del método para la cuantificación de alcohol en sangre por cromatografía gaseosa con detector de ionización de llama y espacio de cabeza y correlación con el método enzimático / Validation of the method for the quantification of blood alcohol by gaseous chromatography with flame ionization detector and head and correlation space with the enzymatic method

El presente estudio describe la estandarización del método para la cuantificación de alcohol en sangre por Cromatografía Gaseosa con Detector de Ionización de llama y espacio de cabeza. La separación del alcohol de una matriz compleja como la sangre fue llevada a cabo de manera exitosa utilizando una columna ELITE-1, la fase móvil o gas de arrastre es una mezcla de hidrógeno y aire, inyector split y detector de ionización de llama. El método fue validado con los siguientes parámetros: especificidad, linealidad, precisión, exactitud, límite de detección y límite de cuantificación. También se realizó la prueba de aptitud del sistema. El método fue específico para el alcohol, la respuesta fue lineal en el rango de 0,125 ­ 1,0 mg/mL de concentración del analito. El valor del coeficiente de variación o desviación estándar relativa (C.V. o DSR) para la precisión fue óptimo. La recuperación media fue de 99,06%. Y el límite de detección y cuantificación resultaron óptimos para la cuantificación de alcohol en sangre en el rango definido. Finalmente el método cromatográfico fue correlacionado con el método analítico (previamente validado) actualmente utilizado en la División de Dosage Etílico del Instituto de Investigaciones Técnicas de la Universidad Policial Mariscal Antonio José de Sucre, mediante el análisis estadístico de las respuestas analíticas de ambos métodos se obtuvo una muy buena correlación por lo que se concluye que el método cromatográfico puede ser utilizado para los fines consiguientes.

The present study describes the standardization of the method for the quantification of alcohol in blood by Gas Chromatography with Flame Ionization Detector and headspace. The separation of the alcohol from a complex matrix such as blood was successfully carried out using an ELITE-1 column, the mobile phase or entrainment gas is a mixture of hydrogen and air, split injector and flame ionization detector. The method was validated with the following parameters: specificity, linearity, precision, accuracy, limit of detection and limit of quantification. The system fitness test was also performed. The method was alcohol specific, the response was linear in the range of 0.125 - 1.0 mg / mL analyte concentration. The value of the coefficient of variation or relative standard deviation (C.V. or DSR) for precision was optimal. The mean recovery was 99.06%. And the limit of detection and quantification were optimal for the quantification of blood alcohol in the defined range. Finally the chromatographic method was correlated with the enzymatic method (previously validated) currently used in the Ethical Dosage Division of the Institute of Technical Investigations of the Mariscal Antonio José de Sucre Police University, through the statistical analysis of the analytical responses of both methods a very good correlation was obtained by which it is concluded that the chromatographic method can be used for the consequent purposes.

Desarrollo de una metodología por cromatografía gaseosa acoplada a espectrometría de masas (GC-MS) para el análisis de benzodiacepinas en productos farmacéuticos

Las benzodiacepinas son psicofármacos sintéticos que poseen las siguientes propiedades farmacológicas: son ansiolíticos, sedativos, hipnóticos. Suelen ser utilizadas como drogas de abuso, por lo que es necesario un exhaustivo control de la venta y uso porque generan gran tolerancia y dependencia. Con la finalidad de generar una base de datos propia, se incorporaron espectros de masas de diversas sustancias de interés farmacológico y toxicológico a la biblioteca del cromatógrafo gaseoso que tiene acoplado un detector espectrométrico de masas. Se desarrolló una metodología para la detección e identificación de benzodiacepinas, ya que se pueden aislar los analitos de interés mediante una extracción líquido-líquido y luego analizar por cromatografía gaseosa. Puede ser aplicable en primera instancia para la búsqueda de analitos conocidos o no declarados en muestras de diverso origen que ingresan al Laboratorio Nacional de Control, para posteriormente continuar el análisis utlizando técnicas farmacopeicas u otros métodos para la cuantificación de benzodiacepinas. Es por ello que puede ser considerada como una técnica confirmatoria y/o complementaria. Mediante esta metodología de screening general por GC-MS se determina simultáneamente gran parte de las benzodiacepinas, siendo aplicable para el análisis de distintos tipos muestras lo cual permite dar una rápida respuesta acerca de la identidad química de los analitos.

Caracterización de aceites de las semillas de Moringa oleífera a partir de la extracción por diferentes métodos / Characterisation of Moringa oleifera's oils from different extraction methods

La Moringa oleífera es una planta que se utiliza como materia prima en diferentes industrias, como la alimentaria, farmacéutica y cosmética. Una de las partes aprovechables del árbol es la semilla debido a su contenido entre un 30 y 45 % de aceite. Sus propiedades terapéuticas potencian su uso en el tratamiento de más de 300 enfermedades. En esta investigación se caracterizó el aceite extraído de las semillas de Moringa oleífera de las variedades de origen cubano Supergenious, Plain y Nicaragua, a partir de extracciones sólido-líquido con hexano y etanol como disolventes y por el método de prensado mecánico de la variedad Nicaragua. A través de un diseño de experimento 2K se analizaron las variables relación soluto-disolvente, tiempo de extracción, y la granulometría seleccionándose las corridas con mayores valores de porcentaje de extracción. Los aceites correspondientes a la selección se caracterizaron fisicoquímica y fitoquímicamente y los valores se compararon con variedades de diferentes regiones reportadas en la literatura. Se demostró que el método de prensado es eficiente, económico y no influye en las propiedades del producto obtenido.

Moringa oleífera is a plant that is used as raw material in various industries, including those related to the field of chemistry such as food, pharmaceuticals and cosmetics. One of the usable parts of the tree is the seed because the content between 30 and 45% oil. They enhance its therapeutic use in the treatment of more than 300 diseases. In this research the oil extracted from the seeds of Moringa oleífera varieties of Cuban origin Supergenious, Plain and Nicaragua is characterized from solid-liquid extraction with hexane and ethanol as solvents and by the method of mechanical pressing of the species Nicaragua . Through a design of experiment 2K solute-solvent variable ratio, extraction time were analyzed, and the grain size selected runs with values greater percentage of oil extracted. Oils corresponding to the selection were characterized physic-chemical and phytochemically and were compared with varieties from different regions reported in the literature. It was shown that the pressing method is efficient, economical and has no influence on the product properties obtained.

Validación de un método para cuantificar ácido-11-nor-9-carboxi-delta 9-tetrahidrocannabinol en orina por cromatografía gaseosa-espectrometría de masas previa extracción en fase sólida / Validation of a method for quantify 11-nor-9-carboxy-delta 9-tetrahydrocannabinol in human urine using solid phase extraction and gas chromatography-mass spectrometry

El cannabis es una de las drogas ilegales más usadas a nivel mundial. Su consumo se relaciona con diferentes hechos en el ámbito forense, laboral, deportivo y clínico. Para su detección se utilizan métodos con diferentes fundamentos y alcances (inmunológicos, cromatográficos). En este trabajo se describe un método preciso, reproducible y validado, para la cuantificación del principal metabolito urinario del Δ9-tetrahidrocannabinol, el ácido-11-nor-9-carboxi- Δ 9-tetrahidrocannabinol (THC-COOH), por cromatografía gaseosa-espectrometría de masas (GC-MS). Se efectuó una extracción en fase sólida (SPE) a partir de la orina, previa hidrólisis alcalina. Se utilizó el análogo deuterado (THC-COOH D3) como estándar interno. El análisis por GC-MS se realizó en modo SIM. La curva de calibración fue lineal en el rango de trabajo (10-100 ng/ml, r > 0,999) y el límite de cuantificación fue de 10 ng/ml. La recuperación absoluta estuvo comprendida entre el 91,0 y 99,0 %. La precisión intra e inter ensayo fue de 1,06 a 1,26 y 3,59 a 9,80 %, respectivamente. El método fue aplicado a muestras reales, positivas por test inmunológico, resultando ser muy útil y fiable en el análisis de rutina de THC-COOH en orina humana con fines toxicológicos.

Cannabis is one of the most widely used illegal drug in the world. Its consumption is related to different forensic, work, sports and clinical events. In order to determinate the presence of cannabis, different methods with distinct fundamentals and scopes (immunoassay and chromatography) are applied. This report described an accurate, reproducible, and validated gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) method for the quantitation of 11-nor-9-carboxy- Δ9-tetrahydrocannabinol (THCCOOH), the major metabolite of Δ9-tetrahydrocannabinol in urine. A solid phase extraction (SPE), previous alkaline hydrolysis, was performed on the urine sample. Its deuterated analog (THC-COOH D3) was used as internal standard. The GC-MS analysis made by selected ion monitoring (SIM). Calibration curve was linear over the specified range (10 -100 ng/ml; r > 0.999) and limit of quantitation was 10 ng/ml. Absolute recoveries ranged from 91.0 to 99.0. Intra-assay and inter assay precision ranged from 1.06 to 1.26 and 3.59 to 9.80 %, respectively. The method has been applied to real samples, positive to immunological screening test, resulting to be very useful and reliable in routine analysis of THC-COOH in human urine for toxicological purposes.

Creatine metabolism: detection of creatine and guanidinoacetate in saliva of healthy subjects / Metabolismo de creatina: detección de creatina y guanidinoacetato en saliva de sujetos sanos

Creatine (Cr) plays an important role in storage and transmissionof phosphate-bound energy. Cerebral creatine deficiencysyndromes comprise three inherited defects in Cr biosynthesis andtransport. The aim of this study was to investigate whether Cr andGuanidinoacetate (GAA) can be detected in saliva of healthysubjects and to establish the relationship between salivary andplasma levels of these molecules. An adapted gas chromatography(GC) method is described for the quantification of Cr and GAAbiomarkers in saliva. Reference values were established for GAAand Cr in saliva. These values were age dependent (p= 0.001). Nodifference between genders was observed. We detected a differencebetween GAA and Cr concentrations in saliva and in plasma. TheGC method for simultaneous determination of GAA and Cr inhuman saliva is fast, reliable, sensitive, non-invasive and preciseto use as a biochemical approach in early detection of cerebralcreatine deficiency syndromes.

La creatina (Cr) juega un importante rol en el almacenamiento y el transporte de energía unida al fosfato. Los síndromes de deficiencia de creatina cerebral comprenden tres defectos genéticos en la biosíntesis y transporte de creatina. Es propósito de este estudio investigar si el guanidinoacetato (GAA) y la Crpueden ser detectados en saliva de sujetos sanos e investigar la relación entre los valores de GAA y Cr en saliva con los niveles en plasma de estas moléculas. Se describe un método modificado de cromatografía gaseosa para la cuantificación de los biomarca -dores, Cr y GAA en este biofluído. Se establecieron valores de referencia para GAA y Cr. Estos valores dependen de la edad (P=0.001). No se observaron diferencias entre género. Se detectóuna diferencia entre la concentración de GAA y Cr en saliva con respecto al plasma. El método adaptado de cromatografía gaseosa para la determinación simultánea de GAA y Cr en saliva humana es fácil, seguro, sensible, no invasivo y preciso para utilizar como aproximación bioquímica en la detección temprana de lossíndromes de deficiencia de creatina cerebral.

Diagnóstico bioquímico de acidurias orgánicas en Cuba: periodo 2008-2013 / Biochemical diagnosis of organic acidurias in Cuba: 2008-2013 period / Diagnóstico bioquímico das acidúrias orgÔnicas em Cuba: periodo 2008-2013

Las acidurias orgánicas son las enfermedades metabólicas hereditarias más frecuentes en pacientes pediátricos con estado crítico de enfermedad. Este trabajo describe la experiencia cubana en el diagnóstico de estas enfermedades. Desde julio de 2008 hasta diciembre de 2013 se procesaron las orinas de pacientes cubanos con sospecha de aciduria orgánica. El perfil de ácidos orgánicos se obtuvo por cromatografía gaseosa acoplada a espectrometría de masas. Se analizaron muestras de orinas de 488 pacientes cubanos provenientes de todo el país. Del total de muestras procesadas, 29 mostraron niveles elevados de ácido láctico, pero no se realizó el diagnóstico confirmatorio de acidurias lácticas primarias en estos casos. Otras acidurias frecuentes entre los casos analizados fueron: acidurias metilmalónicas (5), deficiencia de acil-CoA deshidrogenasa de cadena media (3), alcaptonuria (3) y aciduria propiónica (3). Los hallazgos clínicos más frecuentes en los pacientes diagnosticados fueron la acidosis metabólica y los signos neurológicos. Los resultados muestran la importancia del análisis del perfil de ácidos orgánicos en niños con estado de gravedad; el diagnóstico acertado de estas enfermedades es decisivo para definir el tratamiento más efectivo y ofrecer a sus familias asesoramiento genético y la posibilidad de diagnóstico prenatal.(AU)

Organic acidurias are the most frequent hereditary metabolic disorders in severely ill pediatric patients. In this work, the Cuban experience in the diagnosis of organic acidurias is reported. From July 2008 to December 2013, urine samples were collected from Cuban patients with clinical suspicion of inherited metabolic diseases. The analysis of urinary organic acid profile was performed by gas chromatography coupled to mass spectrometry. Urine samples from 488 Cuban patients from all over the country were processed. Out of the total number, 29 cases showed increased levels of lactic acid; however the confirmatory diagnosis of primary lactic acidurias was not carried out. Other frequent disorders among analyzed cases were methylmalonic acidurias (5), medium chain acyl-CoA deshydrogenase deficiency (3), alkaptonuria (3) and propionic aciduria (2). Metabolic acidosis and neurological symptoms were the most common clinical findings among diagnosed children. The results show the importance of organic acidurias testing in severely ill patients, since the accurate diagnosis of these diseases is crucial to define the most effective treatment for affected patients and it makes it possible to provide patients and their families with the possibility of proper genetic counseling and prenatal testing.(AU)

As acidúrias orgÔnicas sÒo as doenþas metabólicas hereditárias mais frequentes nos pacientes pediátricos severamente doentes. Este trabalho descreve a experiÛncia cubana no diagnóstico dessas doenþas. Entre julho de 2008 e dezembro de 2013 a urina de pacientes cubanos suspeitos de apresentar acidúrias orgÔnicas foi analisada. O perfil de ácidos orgÔnicos foi obtido por cromatografia gasosa acoplada O espectrometria de massas. Foram analisadas amostras de urina de 488 pacientes cubanos provenientes de todo o país. Das amostras processadas, 29 apresentaram níveis elevados de ácido láctico, mas nÒo foi realizado o diagnóstico confirmatório de acidúrias lácticas primárias nesses casos. Outras acidúrias frequentes entre os casos investigados foram: acidúrias metilmal¶nicas (5), deficiÛncia de acil-CoA desidrogenase de cadeia média (3), alcaptonúria (3) e acidúria propi¶nica (3). Os achados clínicos mais frequentes nos pacientes diagnosticados foram a acidose metabólica e as manifestaþ§es neurológicas. Esses resultados mostram a importÔncia da análise do perfil de ácidos orgÔnicos em crianþas em estado grave; o diagnóstico correto destas doenþas é decisivo para definir o tratamento mais efetivo e oferecer aos familiares assessoria genética e a possibilidade de diagnóstico pré-natal.(AU)

Diagnóstico de Acidemia Propiónica por Cromatografía Gaseosa acoplada a Espectrometría de Masa a propósito de un caso / Diagnosis of propionic acidemia by gas chromatography coupled to mass spectrometry in a case analysis

La acidemia propiónica es una enfermedad metabólica hereditaria causada por la deficiencia de la propionil-CoA carboxilasa, enzima mitocondrial dependiente de biotina. La enfermedad es clínicamente heterogénea y es una de las acidurias orgánicas más frecuentes. Presentamos el primer caso cubano conocido con una forma severa de acidemia propiónica, con acidosis y muerte. El diagnóstico se realizó a través de la técnica de cromatografía gaseosa acoplada a espectrometría de masas. Nuestro objetivo es destacar la importancia del análisis de los ácidos orgánicos en orina entre las primeras líneas de exámenes en niños gravemente enfermos sin diagnóstico. El diagnóstico definitivo es importante ya que sirve de pauta para establecer un tratamiento adecuado y permite al genetista brindar al paciente un asesoramiento genético apropiado(AU)

Propionic acidemia is an inherited metabolic disease caused by a deficiency in the propionyl-CoA carboxilase, a biotin-dependent mitochondrial enzyme. The disorder is a clinically heterogeneous disease and one of the most frequently occurring organic acidurias. We report the first Cuban case with a severe form of propionic acidemia followed by acidosis and death. The diagnosis was carried out by gas chromatography coupled to mass spectrometry. Our aim is to highlight the importance of organic acids urine analysis as part of the first laboratory tests in undiagnosed seriously ill children. The definitive diagnosis is important as it serves as a clear guideline to establish a suitable treatment and allows geneticists to provide patients with a proper genetic counseling(AU)

Desarrollo de un método de CLAR-IR para la determinación de etanol residual en vacuna / Development of a HPLC-IR method for determination of residual ethanol in vaccine

Los ingredientes farmacéuticos activos de la vacuna antimeningocócica cubana VA-MENGOC-BC TM (vesículas de membrana externa purificadas de Neisseria meningitidis, serogrupo B y polisacßrido capsular purificado de Neisseria meningitidis, serogrupo C) son conservados en etanol, de ahí que dicha vacuna posea un contenido de etanol residual, cuya concentración real no se conocía hasta el momento. Las regulaciones internacionales plantean que los productos biofarmacéuticos y sus ingredientes farmacéuticos activos deben tener bien caracterizadas todas sus impurezas, por lo que el objetivo de este trabajo fue el desarrollo de un método de determinación de etanol mediante cromatografía líquida de alta resolución-índice de refracción para estos fines y su comparación con un método utilizado frecuentemente para cuantificar este solvente, como es la cromatografía gaseosa. El método evaluado resultó ser útil y con una buena robustez para la determinación de este solvente orgßnico en esta vacuna antimenigocócica. No se detectaron diferencias estadísticamente significativas entre los resultados obtenidos al evaluar las mismas muestras de vacuna mediante ambos métodos cromatogrßficos (cromatografía líquida de alta resolución y cromatografía gaseosa), lo que indica la posibilidad del uso de la cromatografía líquida de alta resolución en sustitución de la cromatografía gaseosa para esta determinación.

Active pharmaceutical ingredients of Cuban anti-meningococcal vaccine VA-MENGOC-BC TM (vesicles of purified external membranes of Neisseria meningitidis, B serum-group, and purified capsular polysaccharide of Neisseria meningitidis, serum-group C) are stored in ethanol, thus that such vaccine has residual ethanol content, of which real concentration is not known just now. International regulations propose that the biopharmaceutical products and its active pharmaceutical ingredients must to have well defined all impurities, thus, the aim of present papers was to develop an ethanol assessment method by liquid high performance-refraction index chromatography to these aims and its comparison with a frequent used method to quantify this solvent, like in the case of gas chromatography. Method assessed was very useful and with a good robustness for determination of this organic solvent in this anti-meningococcal vaccine. There were not statistically significant differences among results obtained with assessment of the same samples of vaccine by both chromatographic methods (high resolution liquid and gas), indicating possibility of high performance liquid chromatography use in substitution of the gas one for this determination.

Desarrollo de un método de CLAR-IR para la determinación de etanol residual en vacuna / Development of a HPLC-IR method for determination of residual ethanol in vaccine

Los ingredientes farmacéuticos activos de la vacuna antimeningocócica cubana VA-MENGOC-BC TM (vesículas de membrana externa purificadas de Neisseria meningitidis, serogrupo B y polisacßrido capsular purificado de Neisseria meningitidis, serogrupo C) son conservados en etanol, de ahí que dicha vacuna posea un contenido de etanol residual, cuya concentración real no se conocía hasta el momento. Las regulaciones internacionales plantean que los productos biofarmacéuticos y sus ingredientes farmacéuticos activos deben tener bien caracterizadas todas sus impurezas, por lo que el objetivo de este trabajo fue el desarrollo de un método de determinación de etanol mediante cromatografía líquida de alta resolución-índice de refracción para estos fines y su comparación con un método utilizado frecuentemente para cuantificar este solvente, como es la cromatografía gaseosa. El método evaluado resultó ser útil y con una buena robustez para la determinación de este solvente orgßnico en esta vacuna antimenigocócica. No se detectaron diferencias estadísticamente significativas entre los resultados obtenidos al evaluar las mismas muestras de vacuna mediante ambos métodos cromatogrßficos (cromatografía líquida de alta resolución y cromatografía gaseosa), lo que indica la posibilidad del uso de la cromatografía líquida de alta resolución en sustitución de la cromatografía gaseosa para esta determinación(AU)

Active pharmaceutical ingredients of Cuban anti-meningococcal vaccine VA-MENGOC-BC TM (vesicles of purified external membranes of Neisseria meningitidis, B serum-group, and purified capsular polysaccharide of Neisseria meningitidis, serum-group C) are stored in ethanol, thus that such vaccine has residual ethanol content, of which real concentration is not known just now. International regulations propose that the biopharmaceutical products and its active pharmaceutical ingredients must to have well defined all impurities, thus, the aim of present papers was to develop an ethanol assessment method by liquid high performance-refraction index chromatography to these aims and its comparison with a frequent used method to quantify this solvent, like in the case of gas chromatography. Method assessed was very useful and with a good robustness for determination of this organic solvent in this anti-meningococcal vaccine. There were not statistically significant differences among results obtained with assessment of the same samples of vaccine by both chromatographic methods (high resolution liquid and gas), indicating possibility of high performance liquid chromatography use in substitution of the gas one for this determination(AU)

Diagnóstico in vitro de la deficiencia primaria de carnitina / In vitro diagnosis of primary carnitine deficiency

El transportador de carnitina (OCTN2) es fundamental para el metabolismo mitocondrial de los ácidos grasos de cadena larga. Su carencia produce la deficiencia primaria de carnitina. El presente estudio tuvo como objetivo el análisis de los ácidos grasos producidos por fibroblastos incubados en presencia de sustratos deuterados, mediante cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas (GC - MS) como herramienta diagnóstica de la deficiencia primaria de carnitina. Se encontró un perfil característico en esta deficiencia, lo que permite su diagnóstico in vitro.

Carnitine transporter (OCTN2) is required for the mitochondrial metabolism of long-chain fatty acids. Primary carnitine deficiency is a consequence of its deficiency. The objective of the present study was to analyse the fatty acids produced by fibroblasts incubated with deuterated substrates, using gas chromatography-mass spectrometry as a diagnostic tool for the diagnosis of VLCAD deficiency. A characteristic profile for this deficiency was found using this technique which enables its in vitro diagnosis.

Validation of an analytical methodology by gas chromatography for the assay of barbiturates in blood samples / Validación de una metodología analítica para la determinación de barbitúricos en muestras de sangre por cromatografía gaseosa con detector de ionización de llama

An analytical methodology was developed for the quantitative assay of phenobarbital, pentobarbital and butobarbital in blood samples, using aprobarbital as an internal standard. After sample cleaning by liquid-liquid extraction, the separation was achieved by liquid gas chromatography using a capillary column in pulsed splitless mode, temperature ramp, and helium as carrier gas and flame ionization detector. The methodology was selective, linear, precise and accurate. The linearity was adequate, between 20 and 100 mcg/mL, for all of three barbiturates studied. The developed methodology was applied in two forensic cases presented in the Toxicology lab of the National Institute of Legal Medicine and Forensic Sciences in Bogotá.

Una metodología analítica fue desarrollada y validada para la determinación de butabarbital, pentobarbital y fenobarbital en muestras de sangre, utilizando aprobarbital como estándar interno. Para la identificación de los diferentes fármacos se llevó a cabo una extracción líquido-líquido con posterior separación cromatográfica empleando una columna capilar en modo de inyección pulsado sin división conrampa de temperatura, helio como gas de arrastre y detector de ionización de llama. La metodología validada fue selectiva, lineal, precisa y exacta. La linealidad fue evaluada para concentraciones entre 20 y 100 mcg/mL para cada uno de los tres barbitúricos. La metodología desarrollada se aplicó en dos casos forenses presentados en el Laboratorio de Toxicología del Instituto Nacional de Medicina Legal y Ciencias Forenses en Bogotá.

Validación de un nuevo método analítico por CG con columna capilar para la determinación de alcoholes de alto peso molecular en policosanol ingrediente activo / Validation of a new capillary column GC analytical method for determining long chain fatty alcohols in policosanol active ingredient

El policosanol es una mezcla de 8 alcoholes alifáticos primarios (C24-C34), aislada y purificada a partir de la cera de la caña de azúcar (Saccharum officinarum L.), cuya eficacia como reductor del colesterol, tolerabilidad y seguridad han sido demostradas. Diversos métodos han sido previamente validados para determinar policosanol mediante cromatografía gaseosa (CG) con columna empacada. Sin embargo, las ventajas logradas con la CG capilar la hacen superior y mundialmente extendida en la actualidad respecto a las empacadas. Se desarrolló y validó un nuevo método por CG utilizando una columna capilar para determinar los alcoholes grasos que componen el policosanol ingrediente activo. Los alcoholes fueron analizados como derivados trimetilsil. Se comprobó que el método tuvo una buena linealidad (r2 = 0,9954, CVrespuesta=1,07%, CVpendiente=1,89% y el intervalo de confianza del intercepto incluyó el cero, por lo que no hubo sesgos) y exactitud (recobrado promedio = 100,45%) en todo el intervalo de concentración estudiado de 80-120%. También se demostró su selectividad con muestras sometidas a condiciones de estrés. La repetibilidad y precisión intermedia a la concentración nominal cumplieron los criterios de aceptación (< 2%). La robustez se evaluó mediante un diseño experimental intralaboratorio, en el cual se realizaron siete cambios operacionales, y no se encontraron efectos significativos sobre los resultados observados. El método fue exitosamente validado, y fue apropiado para el control de la calidad y para estudios de estabilidad de este ingrediente activo.

Policosanol is a mixture of 8 long chain primary aliphatic alcohols (C24-C34), isolated and purified from sugar cane (Saccharum officinarum L.) wax, wich cholesterol-lowering efficacy, safety and tolerability has been demonstrated. Several methods for determing policosanol by packed GC column have been previously validated. However, the advantages achieved with the capillary GC make it worldwide currently extended and overcome to the packed ones. A new gas chromatographic method using a capillary column was developed and validated for the determination of the fatty alcohols that compose policosanol active ingredient. The alcohols were analyzed as trimethylsilyl derivatives. Good linearity (r2 = 0,9954, CVresponse=1,07%, CVslope=1,89% and the confidence interval included the zero, then there was no bias) and accuracy (mean recovery = 100,45%) of the method were proven over a range of 80-120% of the nominal concentration. It was also proved its specificity even when samples were subject to stress conditions. Repeatablility and intermediate precision at the nominal 100% value fulfilled the acceptance criteria (< 2%). Ruggedness was evaluated through an intralaboratory experimental design, in which seven operational changes were made, and there was not found any effect on the observed results. The method was sussefully validated being suitable for the quality control process and the stability studies of this active ingredient.